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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件

1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理，通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物累積對(duì)細(xì)胞自身產(chǎn)生危害。

2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)鹽、微量元素等），有機(jī)物（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子等）

3、血清和血漿（提供細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份）

4、溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）

5、氣體環(huán)境（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）

6、其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟

注：所有步驟應(yīng)在無(wú)菌無(wú)毒的超凈工作臺(tái)進(jìn)行。胰蛋白酶處理時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。

取離體的動(dòng)物組織，器官或細(xì)胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個(gè)細(xì)胞，配置形成細(xì)胞懸液。

制備動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基（需加入血清，保證無(wú)菌無(wú)毒），將細(xì)胞接種至培養(yǎng)基，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行初代培養(yǎng)。

當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定程度，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)，用胰蛋白酶再次處理，并用細(xì)胞懸液吹打貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

依照計(jì)數(shù)結(jié)果，分瓶培養(yǎng)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。獲得細(xì)胞系或細(xì)胞株。